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    GB/T4789.11-2003溶血性鏈球菌檢驗(免費下載)

    時間:2013-11-12 11:26  來源:www.999softs.com  作者:耐破度測定儀  點擊:
    GB/T4789.11-2003溶血性鏈球菌檢驗(免費下載)/耐破度測定儀
    前言
    本標準對GB/T 4789. 11-1994《食品衛生微生物學檢驗溶血性鏈球菌檢驗》進行修訂。
    本標準與GB/T 4789. 11-1994相比主要修改如下:
    ——按照GB/T 1.1-2000對標準文本的格式和文字進行修改。
    ——修改并規范原標準中的“設備和材料”。  
    本標準自實施之日起,GB/T 4789. 11-1994同時廢止。
    本標準由中華人民共和國衛生部提出并歸口。
    本標準起草單位:北京市衛生防疫站、中國疾病預防控制中心營養與食品安全所。
    本標準主要起草人:劑以賢、冉陸、付萍、姚景會。
    本標準于1984年首次發布,1994年第一次修訂,本次為第二次修訂。
    1  范圍
    本標準規定了食品中溶血性鏈球菌的檢驗方法。
    本標準適用于各類食品和食物中毒樣品中溶血性鏈球菌的檢驗。
    2耐破度測定儀規范性引用文件
        下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標準。
    GB/T 4789. 282003  食品衛生微生物學檢驗染色法、培養基和試劑
    3設備和材料
    3.1  冰箱:O℃—4℃。
    3.2恒溫培養箱:36℃士1℃。
    3.3恒溫水浴鍋:36℃土1℃。
    3.4  顯微鏡:10×~IOO×。
    3.5均質器或滅菌乳缽。
    3.6離心機:4 000 r/min。
    3.7架盤藥物天平:O g~500g,精確至0.5g。
    3.8滅菌試管;10 mm×100 mm、16 mm×160 mm。
    3.9  滅菌吸管:1 rnL(具0.01 mL刻度)、5 mL、lO mL(具0.1 mL刻度)。
    3. 10滅菌錐形瓶:100 mL。
    3. 11  滅菌培養皿:直徑90 mm。
    3. 12滅菌棉簽、鑷子等。
    4培養基和試劑
    4.1  葡萄糖肉浸液肉湯:按GB/T 4789. 28-2003中4.1規定。在肉浸液肉湯內加入1%葡萄糖。
    4.2  肉浸液肉湯:按GB/T 4789. 28-2003中4.1規定。
    4.3  匹克氏肉湯;按GB/T 4789. 28-2003中4.62規定。
    4.4  血瓊脂平板:按GB/T 4789. 28-2003中4.6規定。
    4.5  人血漿。
    4.6  0.25%氯化鈣。
    4.7  0. 85%滅菌生理鹽水。
    4.8  桿菌肽藥敏紙片(含0. 04單位)。
    5檢驗程序
    檢驗程序見圖1。
    6操作步驟
    6.1  樣品處理
    按無菌操作稱取食品檢樣25 g(mL),加入225 mL滅菌生理鹽水,研成勻漿制成混懸液。
    6.2培養
    將上述混懸液吸取5ml,,接種于50ml_葡萄糖肉浸液肉湯,或直接劃線接種于血平板。如檢樣污染嚴重,可同時按上述量接種匹克氏肉湯,經36℃士l℃培養24 h,接種血平板,置36℃±1℃培養24 h,挑起乙型溶血圓形突起的細小菌落,在血平板上分純,然后觀察溶血情況及革蘭氏染色,并進行鏈激酶試驗及桿菌肽敏感試驗。
    6.3  形態與染色
    本菌呈球形或卵圓形,直徑0.5μm~lμm,鏈狀排列,鏈長短不一,短者4個~8個細胞組成,長者20個~30個,鏈的長短常與細菌的種類及生長環境有關;液體培養中易呈長鏈;在固體培養基中常里短鏈,不形成芽孢,無鞭毛,不能運動。
    6.4培養特性
    該菌營養要求較高,在普通培養基上生長不良,在加有血液、血清培養基中生長較好。溶血性鏈球菌在血清肉湯中生長時管底呈絮狀或顆粒狀沉淀。血平板上菌落為灰白色,半透明或不透明,表面光滑,有乳光,直徑約0.5 mrn~0. 75 mm,為圓形突起的細小菌落,乙型溶血鏈球菌周圍有2 mm~4 mm界限分明、無色透明的溶血圈。
    6.5鏈激醢試驗
        致病性乙型溶血性鏈球菌能產生鏈激酶(即溶纖維蛋白酶),此酶能激活正常人體血液中的血漿蛋
    白酶原,使成血漿蛋白酶,而后溶解纖維蛋白。
    吸取草酸鉀血漿o.2 ml,,加0.8 ml.滅菌生理鹽水,混勻,再加入18h~24h、36℃土1℃培養的鏈球菌培養物0.5 mL及0.25%氯化鈣0.25 ml.(如氯化鈣已潮解,可適當加大至0.3%~0.35%),振蕩搖勻,置于36℃±1℃水浴中I0 min,血漿混合物自行凝固(凝固程度至試管倒置,內容物不流動),然后觀察凝固塊重新完全溶解的時間,完全溶解為陽性,如24h后不溶解即為陰性。
        草酸鉀人血漿配制:草酸鉀0.01g放人滅菌小試管中,再加入5mL人血,混勻,經離心沉淀,吸取上清液即為草酸鉀人血漿。
    6.6桿菌肽敏感試驗
        挑取乙型溶血性鏈球菌液,涂布于血平板上,用滅菌鑷子夾取每片含有0. 04單位的桿菌肽紙片,放于上述平板上,于36℃士1℃培養18h~24h,如有抑菌帶出現即為陽性,同時用已知陽性菌株作為對照。
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